Neue Coronavirus (2019-nCoV) Nukleinsäure-Diagnoseausrüstung
(PCR-Fluoreszenz-Untersuchung)
Beabsichtigter Gebrauch
Neue Coronavirus (2019-nCoV) Nukleinsäure-Diagnoseausrüstung (PCR-Fluoreszenz-Untersuchung) wird für qualitative Entdeckung der ORF1ab- und n-Gene des neuen coronavirus (2019-nCoV) im Nasenrachenraumputzlappen, oropharyngeal Putzlappen, alveolare Waschungsflüssigkeit, Sputum, Serum, Vollblut und Rückstände von vermuteten Pneumoniefällen mit neuer coronavirus Infektion, Patienten mit vermuteten Gruppen neuer coronavirus Infektion und andere Patienten, die Diagnose oder Differentialdiagnose neuer coronavirus Infektion fordern benutzt.
Für nur in-vitrodiagnosegebrauch. Für nur Berufsgebrauch.
Zusammenfassung
Die Definitionen von „vermuteten Fällen“ und „vermuteten, dass Gruppen von Patienten“ definiert werden, indem man die „Pneumonie-Diagnose und das Behandlungs-Programm für neue Coronavirus-Infektion“ und „auf das Pneumonie-Fall-Überwachungsprogramm für neue Coronavirus-Infektion sich bezieht“, die durch China CDC herausgegeben wird (das currentversion).
Neues Coronavirus (2019-nCoV) Nukleinsäure-Diagnoseausrüstung (PCR-Fluoreszenz-Untersuchung) nur für die zusätzliche Diagnose von in Verbindung stehenden Argumenten und die Notreserve für in-vitrodiagnose während des Pneumonieausbruchs neuer Infektion Coronavirus (2019-nCoV) seit December2019 benutzt wird, diese Ausrüstung, sollte nicht als Routinein-vitrodiagnose in der klinischen Praxis verwendet werden.
Folgen Sie bitte den relevanten Anforderungen der „Pneumonie-Diagnose und des Behandlungs-Programms für neue Coronavirus-Infektion“, „Pneumonie-Verhinderung und Steuerprogramm für neue Coronavirus-Infektion“ und anderen gebräuchlichen Dokumenten.
Die neuen Nukleinfeuerproben Coronavirus sollten mit „technischen Richtlinien für Laborversuche von neuem Coronavirus in China CDC“ übereinstimmen und gute Biosicherheit halten.
Messgrundlage
Indem er quantitative RT-PCR Technologie der Realzeitfluoreszenz auf dem Fluoreszenz quantitativen PCR-Instrument anwendet, verwendet dieser Test das neue coronavirus (2019-nCoV) ORF1ab und die spezifische konservierte Reihenfolge der Kodierung des Gens nucleocapsid Proteins N als die Zielregionen, die für die konservierte Reihenfolge der Doppelzielgene bestimmt sind, um Entdeckung von Beispiel-RNS durch Leuchtstoffsignaländerungen zu erzielen.
Der PCR-Erfassungssystemgebrauch die positive interne Steuerung, die das Vorhandensein von PCR-Hemmnissen in den Probestücken überwacht, indem es ermittelt, ob das interne Steuersignal normal ist, ein falsches negatives Ergebnis zu vermeiden.
Komponenten der Diagnoseausrüstung
Diese Ausrüstung ist ein Verstärkungsreaktionsreagens und enthält die folgenden Komponenten:
| Nein. |
Reagens-Name |
Spezielles u. Menge |
Hauptbestandteile |
| 24 T |
48 T |
| 1 |
Mischung 2019-nCov-PCR |
624µL/tube x 1 |
1248µL/tube x 1 |
Premiere (4,62%), Sonden (1,15%), dNTPs (3,85%), MgCl2 (0,77%), Rnasin (0,48%),
Pcr-Puffer (89,13%)
|
| 2 |
Mischung 2019-nCov-PCR-Enzyme |
96µL/tube x 1 |
192µL/tube x 1 |
Funktelegrafie-Enzym (62,5%),
Taq-Enzym (37,5%)
|
| 3 |
Steuerung 2019-nCov-PCR-Positive |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
Transcriptional IN-VITRORNS, die Ziel-Gene enthält (ORF1 AB, n-Gen) und interne Standardgenfragmente (RNase P) |
| 4 |
Steuerung 2019-nCov-PCR-Negative |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
Normales salziges |
Exemplar-Anforderungen
1. Anwendbare Exemplarart: Nasenrachenraumputzlappen, oropharyngeal Putzlappen, alveolare Waschungsflüssigkeit, Sputum, Serum, Vollblut und Rückstände.
2. Sammlung des Exemplars
Nasenrachenraumputzlappen/oropharyngeal Putzlappen: Sammeln Sie Probe in Übereinstimmung mit den relevanten Bestimmungen " der Exemplar-Sammlungs-Methode“ im „Pneumonie-Labortechnischen Führer für neue Coronavirus-Infektion“ „von der Pneumonie-Verhinderung und vom Steuerplan für neue Coronavirus-Infektion“. Es wird nachgewiesen, dass der Putzlappen vom Nylonrepräsentativkopf machte und ABS-Probenahmestange für Beispielsammlung vorgewählt werden kann.
Nasenrachenraumputzlappen: Das Exemplarsammlungsrohr sollte mit dem Barcode zuerst geklebt werden, der Nasenrachenraumputzlappen sollte gesammeltes within3 soweit wie möglich sein Tage nach dem Anfang der Krankheit. Benutzen Sie Putzlappen, um die Länge zwischen Spitze nasi und Ohrläppchen, dann Kennzeichen mit dem Finger zu messen. Fügen Sie den Putzlappen in die Nasenhöhle in der Richtung des Senkrechten zur Nase ein (Gesicht). Der Putzlappen sollte von der Länge vom Ohrläppchen zum Spitze nasi mindestens halb eingefügt werden. Machen Sie die Putzlappenhalt im nasalen for15 | 30 s, leicht rotate3 | 5mal, setzen schnell Putzlappen in Exemplarsammlungs-Rohr cotaining2 ml Zerstörungs-Puffer (selbe wie Zerstörungs-Puffer im Beispielfreigabe-Reagens) oder probieren das Speicherreagens, das Ribozymhemmnis enthält. Fügen Sie den Putzlappen ein, dann brechen Sie die sterile Putzlappenstange nahe der Spitze, ziehen Sie Rohrkappe und Dichtung mit Schmutzfilm fest.
Oropharyngeal Putzlappen: Das Exemplarsammlungsrohr sollte mit dem Barcode zuerst geklebt werden, der oropharyngeal Putzlappen sollte innerhalb 3 Tage nach dem Anfang der Krankheit soweit wie möglich gesammelt werden. Ein steriler scharender Putzlappen sollte für Probenahme benutzt werden, abwischen gemäßigt die hintere pharyngeal Wand, vermeiden, die Zunge zu berühren. Schnell Platz ein steriler Putzlappen in das Sammlungsrohr benutzt für Sammlung des oropharyngeal Putzlappens. Brechen Sie die sterile Putzlappenstange nahe der Spitze, ziehen Sie Rohrkappe und Dichtung mit Schmutzfilm fest.
Alveolare Waschungsflüssigkeit: Schwere Patienten oder Patienten mit Pneumonie die Fortschritt schnell. Kliniker extract≥5ml BALF in einen aseptischen Behälter 50ml beschriftet mit Beispielbarcode und -überwurfmutter durch aseptische Operation. Sammeln Sie Exemplar, dann ziehen Sie Rohrkappe und Dichtung mit Schmutzfilm fest.
Sputum:
Das Exemplarsammlungsrohr sollte mit dem Barcode zuerst geklebt werden. Öffnen Sie nicht die Fluglinie, um Exemplare zu sammeln, wenn Sie Sputum sammeln. Collect.deep-Hustensputum in eine aseptische Repräsentativwegwerfschale mit Überwurfmutter, Last 2 ml-Protease K (1g/L) in das Probieren der Schale. Sammeln Sie Sputum, dann ziehen Sie Rohrkappe und Dichtung mit Schmutzfilm fest. Senden Sie zur Entdeckung innerhalb Minute 30 soweit wie möglich. Protease K sollte nicht zuerst addiert werden, wenn Exemplare über lange Abstände transportiert werden müssen.
Vollblut:
Blutproben können innerhalb 7 Tage nach dem Anfang oder die kritischen Patienten oder die Patienten gesammelt werden, die mit Vorhandensein von Viren im Blut betrachtet werden. Das Exemplarsammlungsrohr sollte mit dem Barcode zuerst geklebt werden. Sammeln Sie 2~4ml von Blutproben in das Vakuumblut-Sammlungsrohr, das EDTA-Antigerinnungsmittel enthält.
Rückstände:
Für Patienten mit gastro-intestinalen Symptomen wie Diarrhöe am Anfangsstadium der Krankheit, Rückstände der Konserve 3~5g (Sojabohnengröße). Das Exemplarsammlungsrohr sollte mit dem Barcode zuerst geklebt werden. Sammeln Sie Probe in Exemplarsammlungsrohr mit der Überwurfmutter, die normale salzige (enthält Ribozymhemmnis kann addiert werden, wenn Bedingungen ermöglichen), dann Dichtung 2ml mit Schmutzfilm.
Nach Beispielsammlung wird es empfohlen, um in Beispielspeicher-Reagens für Bewahrung zu setzen.
Es ist nachgewiesen worden, dass Bewahrungslösung, wie normales salziges, TE-Puffer, 2-4M enthaltenes Guanidin (wie Guanidinhydrochlorid) als Beispielspeicher-Reagens für Beispielbewahrung auch benutzt werden kann. Das Beispielspeicher-Reagens, das Guanidin enthält, kann nicht direkt angepasst werden, um das Freigabe-Reagens zu probieren, das durch Sansure Biotech Inc. für Nukleinsäureextraktion hergestellt wird. Bei Bedarf wird es empfohlen, um Extraktion der Nukleinsäure-(DNA/RNA) oder Reinigungs-Ausrüstung (magnetische Perlenmethode) (Referenznummer zu benutzen: S1002E) hergestellt durch Sansure Biotech Inc. oder die Viren-RNS Mini Kit (50) QIAamp hergestellt durch QIAGEN für Nukleinsäureextraktion.
3. Lagerung und Lieferung von Exemplaren:
Die geprüft zu werden Exemplare können sofort verarbeitet werden, die innerhalb 24 Stunden geprüft zu werden Exemplare, können an 4℃ gespeichert werden. Exemplare, die nicht innerhalb 24 Stunden ermittelt werden können, sollten an -70℃ gespeichert werden oder unten (in Ermangelung -70℃ Lagerbedingungen, können die geprüft zu werden Exemplare an -20℃ für 10 Tage gespeichert werden, Nukleinsäure können an -20±5℃ für 15 Tage gespeichert werden). Mehrfache Frost-/Tauwetterzyklen sollten vermieden werden. Exemplare sollten in einen gefrorenen SiegelPitcher mit Eis oder in einen Siegelschaumkasten mit Eis transportiert werden. Die Inaktivierung von Proben an 56℃ für 30min beeinflußt nicht die Entdeckung dieser Ausrüstung.
Ergebnis-Analyse (beziehen Sie sich auf Benutzerhandbuch des Instrumentes, um die Einstellungen zu justieren.)
Ergebnisse werden automatisch gespeichert, wenn Reaktionen abgeschlossen werden. Analysieren Sie Verstärkungskurve des Ziels der Entdeckung und der internen Steuerung. Justieren Sie Anfangs-, Enden- und Schwellenwerte der Grundlinie des Diagramms entsprechend Analyseergebnis (Benutzer können die Werte entsprechend der tatsächlichen Situation justieren. Anfangswert kann zwischen 3-15 und Endwert zwischen 5-20 eingestellt werden. Justieren Sie die Verstärkungskurve der negativen Steuerung, um Ebene zu sein oder unterhalb der Schwelle). Klicken Sie „zu analysieren“, um die Analyse einzuführen, vergewissern Sie sich jedes Parameters, den Anforderungen gerecht zu werden, die „in der Qualitätskontrolle“ gegeben werden. Gehen Sie „zum Platten“ Fenster, qualitative Ergebnisse zu notieren.
Qualitätskontrolle
| Einzelteil |
Steuerung 2019-nCoV-PCR-Negative |
Steuerung 2019-nCoV-PCR-Positive |
| Ct-Wert |
Kein Ct oder Ct > 40 am Kanal FAM, ROX und HEXE
(Interne Steuerung)
|
≤ 35 am Kanal FAM, ROX und HEXE
(Interne Steuerung)
|
Das Testergebnis wird als gültiges behandelt, wenn alle Bedingungen im oben erwähnten für den gleichen Test getroffen werden. Andernfalls wird das Testergebnis behandelt, wie ungültig und muss erneut getestet werden.
Erklärung des Entdeckungs-Ergebnisses
| Schlussfolgerung |
Verstärkungsergebnisse |
| Positiv 2019-nCoV |
Es gibt die typische S-Formverstärkungskurve, die an FAM- und/oder ROX-Kanal ermittelt werden, und die Verstärkungskurve, die am HEXEN-Kanal ermittelt wird, Ct≤40. |
| Negativ 2019-nCoV |
Es gibt keine typische S-Formverstärkungskurve (kein Ct) oder Ct > 40 ermittelt an FAM- und ROX-Kanal und die Verstärkungskurve, die am HEXEN-Kanal ermittelt wird, Ct-≤ 40. |
Es gibt keine typische S-Formverstärkungskurve, die an FAM-, ROX- und HEXEN-Kanal ermittelt wird (kein Ct) oder an Ct > 40. Es wird angezeigt, dass die Konzentration des Exemplars zu niedrig ist, oder es gibt Störungssubstanzen, die die Reaktion hemmen. Das Testergebnis ist ungültig. Eine Untersuchung sollte durchgeführt werden, um die Gründe herauszufinden und auszuschließen, sammelt bitte Exemplar wieder und testet die Exemplare erneut.
Anmerkung: Für Viruskulturen gibt es keine Anforderungen für interne Steuertestergebnisse.
Lagerung und Stabilität
1. Die Diagnoseausrüstung sollte in einem Siegelbeutel at-20±5°C gespeichert werden und vor Licht geschützt werden. Die Ausrüstung ist provisorisch für 6 Monate gültig.
2. Beziehen Sie bitte sich das Herstelldatum und auf Verfallsdatum an der Umverpackung.
3. Die Reagenzien halten gültig und stabil innerhalb des Verfallsdatums, wenn sie nicht benutzt werden. Solange der Behälter des Reagens geöffnet ist, sollten Frost/die Tauwetterzyklen drei nicht übersteigen.
Kompatibles Instrument
Die Diagnoseausrüstung ist auf SLAN-96P, ABI7500, Life Technologies QuantStudio TM5, RocheCobas480, InstrumentPCR-MA-6000 anwendbar.
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